Патологическое состояние суставов
Патологическое состояние суставов также изменяет морфологию и метаболическую активность хондроцитов. Так, J. Kouri и соавторы (1996) идентифицировали три субпопуляции хондроцитов в хряще при OA. Хондроциты из поверхностной и верхней части середины хряща образуют скопления и синтезируют большее количество протеогликанов и коллагена (Lafeber F. etal., 1992; Aigner Т. et al., 1997). ТФР-Р и инсулинопо-добный фактор роста (ИФР) способны стимулировать синтез протеогликанов хондроцитами и частично нивелировать эффекты ИЛ-1 и ФНО-а. Эксплантаты хряща, пораженного OA, и хондроциты, изолированные из хряща больного с OA, более чувствительны к стимуляции ТФР-р, чем хондроциты здорового хряща. Эти различия, вероятнее всего, связаны с фенотипическими изменениями хондроцитов в верхних слоях суставного хряща (Lafeber F. et al., 1997).
Изоляция отдельных хондроцитов достигается последовательной обработкой протеолитическими ферментами ВКМ. После их высвобождения из ВКМ изолированные клетки идеально подходят для исследования синтеза компонентов матрикса de novo. Некоторые авторы используют только коллагеназу клостридий, другие — предварительно инкубируют хрящ с трипсином, проназой, ДНКазой и/или гиалурони-дазой. Количество изолированных клеток зависит от используемых ферментов. Так, при обработке одной коллагеназой из 1 г ткани можно получить 1,4Т06 хондроцитов, тогда как при использовании проназы, гиалу-ронидазы и коллагеназы — 4,3-106. При обработке коллагеназой в культуре клеток остаются аггрекан, белки, ИЛ-6, ИЛ-8 в значительно большем количестве, чем при последовательной обработке различными ферментами. Существует несколько объяснений этим различиям между двумя клеточными культурами:
• Клеточные рецепторы повреждены или угнетены под действием ферментов (Loeser R., 1993), ТФР-р ингибирует ДНК и синтез протеогликанов в только что изолированных хондроцитах (1-й день), тогда как ДНК и синтез протеогликанов хондроцитов, культивируемых в монослое (7 дней), стимулируется ТФР-р (vander Kraan P. et al., 1992). Однако для реэкспрессии этих компонентов мембраны необходим адекватный период перед началом эксперимента.