Взвесь хондроцитов в естественном ВКМ
Взвесь хондроцитов в естественном ВКМ. Хондроциты можно культивировать во взвеси в трехмерном матриксе (мягкий агар, агароза, колла-геновый гель или губка, гиалуроновая кислота, фибриновый клей, бусины алгината).
Культивируемые в агарозе хондроциты сохраняют свой нормальный фенотип и синтезируют коллаген II типа и тканеспецифические аггрека-новые агрегаты (Benya P., Schaffer J., 1982). При культивировании в агарозе синтезируемые клеткой протеогликаны выделяются в среду в течение 50 дней. Для сравнения — в монослойной культуре клеточная фаза переполняется гликозаминогликанами уже в первые 5-6 дней культивирования; при культивировании в среде после усиления синтеза и высвобождения гликозаминогликанов в первые 8-10 дней наступает времязависимое их уменьшение (Spirito S. etal., 1993). Тем не менее, поведение хондроцитов при их культивировании в агарозе отличается от такового в условиях in vivo. В агарозе большое количество синтезируемых агрегатов аггрекана содержит более мелкие и в меньшем количестве молекулы, чем in vivo (Cornelissen М. et al., 1993). ТФР-Р стимулирует синтез протеогликанов в эксплантате (Morales Т., Roberts А., 1988; Pujol J.-P. etal., 1991), однако снижает синтез аггрекана в агарозе (Skantze К. et al., 1985).
Алгинат — линейный полисахарид, полученный из коричневой морской водоросли. В присутствии двухвалентных катионов, таких, как ионы Са2+, этот полимер становится гелем. Каждый хондроцит, попавший в алгинат, окружен матриксом из отрицательно заряженных полисахаридов, поры которого соизмеримы с таковыми в гиалиновом хряще. Матрикс, который формируют хондроциты в бусинах алгината, состоит из двух отделов — тонкого слоя клеточно-ассоциированного матрикса, соответствующего перицеллюлярному и территориальному матриксу, суставного хряща и более удаленного матрикса, эквивалентного межтерриториальному в нативной ткани. На 30-й день культивирования относительный и абсолютный объем, занимаемый клетками, и каждый из двух отделов в бусине алгината почти полностью идентичны таковым в на-тивном хряще (Hauselmann Н. et al., 1996; Petit В. et al., 1996).