Культура хондронов
Культура хондронов. Хондрон — структурная, функциональная и метаболическая единица суставного хряща, состоящая из хондроцита, его перицеллюлярного матрикса и компактной филаментной капсулы и отвечающая за гомеостаз матрикса. Хондроны механическим путем экстрагируют из хряща и собирают с помощью нескольких последовательных низкоскоростных гомогенизаций. Изолированные из зон разной глубины хряща хондроны можно разделить на четыре категории: единичный хондрон, спаренные хондроны, множественные (три или более) линейно расположенные хондроны (колонки хондронов), скопление хондронов.
Единичные хондроны обычно обнаруживают в средних слоях интакт-ного хряща, спаренные — на границе средних и глубоких слоев, линейно расположенные множественные хондроны типичны для глубоких слоев интактного хряща. Наконец, скопления хондронов состоят из случайно организованных групп единичных и спаренных хондронов, которые сохраняют агрегированное состояние после гомогенизации. Скопления хондронов представляют собой крупные фрагменты хряща, обычно содержащие несколько хондронов и радиально расположенные коллагеновые фибриллы, т. е. типичная организация, характерная для глубоких слоев матрикса (Poole С.A. et al., 1988). Хондроны иммобилизируют в прозрачной агарозе, что позволяет проводить исследования их структуры, молекулярного состава и метаболической активности. Систему хондрон — агароза рассматривают как микромодель хряща, которая отличается от традиционной системы хондроцит — агароза тем, что сохраняется естественное микроокружение, нет необходимости осуществлять его синтез и сборку (Poole С, 1997). Культура хондронов — модель для изучения взаимодействий клеток и матрикса в суставном хряще в норме и при патологических состояниях.
Культура бессмертных хондроцитов. Для создания перманентных линий клеток используют рекомбинантную ДНК или онкогенсодержащие вирусы, способные сделать клетку «бессмертной» (Horton W. et al., 1988; Thenet S. et al., 1992; Oxford J. et al., 1994; Mallein-Gerin F. et al., 1995). Бессмертные хондроциты обладают способностью к бесконечной пролиферации, сохраняя стабильный фенотип. F. Mallein-Gerin и соавторы (1995) показали, что SV40T-OHKoreH индуцирует пролиферацию хондроцитов мыши, которые при этом продолжают стабильно экспрессиро-вать коллагены II, IX и XI типов, а также суставной аггрекан и связующий белок. Однако такая линия клеток приобретает способность синтезировать коллаген I типа при культивировании ее в монослойной культуре или в агарозном геле.
W. Horton и соавторы (1988) описали линию бессмертных клеток с низким уровнем экспрессии мРНК коллагена II типа. Эти клетки были получены путем их трансформации ретровирусом мыши, содержащим v-myc- и у-га/-онкогены. Этот тип клеток представляет собой уникальную модель для изучения взаимодействий суставного матрикса в отсутствие коллагена II типа, а также регуляцию синтеза коллагена II типа (Oxford J. etal., 1994).